عفونت توام تریکوموناس فتوس و ژیاردیا دئودنالیس در دو گربه
عفونت توام تریکوموناس فتوس و ژیاردیا دئودنالیس در دو گربه مبتلا به اسهال مزمن.
Coinfection with Tritrichomonas foetus and Giardia duodenalis in Two Cats with Chronic Diarrhea
تظاهر بیماری
دو گربه ماده مین هم توله شش ماهه توسط یک دامپزشک تحت معاینه قرار داشته اند بطوری که یکی از آنها تاریخچه ای سه ماه از اسهال متعفن آبکی داشته . تشخیص قبلی بدنبال تجزیه تحلیل مدفوعی در هر دو گربه یک عفونت آسکاریسی پایدار را نشان داده و حیوانها توسط درمانگر با میلبی مایسین اوکسیم و پرازی کوآنتل (به ترتیب 2 میلی گرم برای هر کیلوگرم و 5 میلی گرم برای هر کیلوگرم ، خوراکی تک دوز )تحت درمان قرار گرفته اند . بدلیل تداوم اسهال در گربه مبتلا تجزیه و تحلیل مدفوع به منظور تعیین تاثیر گذاری در مان بر علیه آسکاریس و آلودگی با ژیاردیا تکرار شده . نتیجه آزمایش در گربه برای آنتی ژن مدفوعی ژیاردیا مثبت بود(IDEXX SNAP_ Giardia Test) و تحت درمان فنبندازول (50 میلی گرم برای هر کیلوگرم خوراکی تک دوز ) برای 5 روزقرار گرفت، که تنها بهبودی متوسط و گذرایی در قوام مدفوع حاصل گردید. چنانکه چند هفته پس از این درمان اسهال آبکی تداوم یافت. آزمایش مدفوع دیگری انجام شد که حضور آنتی ژن ژیاردیا را آشکار نمود.
درمان با اسپیرامایسین و مترینیدازول (به ترتیب 75000واحد برای هر کیلوگرم و 12.5 میلی گرم برای هر کیلو خوراکی یکبار در روز ) برای 10 روز انجام شد. مدفوع قوام یافته و بدبود نبود، اما چند روز بعد از درمان نشانه ها بازگشتند. در این مدت گربه ها هنوز از همان بستر استفاده می نمودند و حتی مدفوع آن که همیشه شکل می گرفت شروع به تظاهر اسهال موکوسی نمود. لذا نمونه های مدفوع اخذ شده از دو حیوان برای آزمایشگاه انگل شناسی دامپزشکی برای ارزیابی انگلی ارائه گردید. تمامی تجزیه تحلیل های انگل شناسی برای هر دو نمونه مدفع در هر دو گربه انجام گردید. نخست دو نمونه پس از یخچالی شدن در همان روز ارزیابی شدند، در حالی که نمونه های متعاقب بصورت تازه در عرض سی دقیقه پس از تخلیه مدفوع مورد ارزیابی قرار گرفتند. با فن آوری غوطه وری گریز از مرکزی توسط محلول نیترات سدیم(NaNo3) اسمیر های تازه مدفوع تهیه و با محلول لوگول رنگ آمیزی شدند، و تعین آنتی ژن مدفوعی با استفاده از کیت تجاری در دسترس انجام گردید. هیچ نوع کیست تک یاخته ای یا تروفوزوئیت و هیچ تخم انگلی با روش گریز از مرکزی در هر دو گربه معین نشد،در حالی که برای آنتی ژن مدفوعی ژیاردیا مثبت بود. به هر حال در اسمیر مدفوع رنگ آمیزی شده با محلول لوگول که از نمونه یخچالی گربه مبتلا به اسهال آبکی مزمن گرفته شد بود چندین کیست و تروفوزوئیت ژیاردیا دئودنالیس و عناصر نامعین دیگر پیدا شد. بعداً معلوم شد که این عناصر نامعین کوچک تر از کیست و تروفوزوئیت ژیاردیا دئودنالیس ( با طول میانگین 8.18 میکرومتر با حداقل حد اکثر طول 6.98-8.88 میکرومتر ؛ پهنای میانگین 6.35 با حداقل –حداکثر اندازه 6.06-6.83 میکرومتر) قطره ای شکل و به رنگ قهوه ای هستند. یک رنگ آمیزی اضافی با گیمسا برای این اسمیر های مدفوعی حضور این عناصر قطره ای شکل نامعین به همراه کیست ها و تروفوزوئیت های ژیاردیا دئودنالیس را تایید نمود (تصویر 1) و معین شد که دیگر عناصر ویژگی های ریخت شناسی مشابهی را با تروفوزوئیت های تریکوموناس از خود نشان می دهند(تصویر 2).
تصویر 1: اسمیر های مدفوع یک گربه مین 6 ماهه مبتلا به اسهال آبکی مزمن رنگ آمیزی شده با محلول لوگول (a-c) و گیمسا(d-f) . a و d نشانگر تروفوزوئیت ژیاردیا دئودونالیس بوده؛ b و e نشانگر کسیت ژیاردیا دئودونالیس می باشند. C و f تریکوموناد های قطره ای شکل را نشان می دهند.
تصویر 2: تریکوموناد ها در اسمیر مدفوع اخذ شده از کربه دچار اسهال . نوک پیکان در a نشانگر تاژک قدامی برآمده از تروفوزوئیت بوده ، در حالی که نوک پیکان در b نشانگر غشای مواج است.
در رنگ آمیزی گیمسا این عناصر قطره ای شکل نامعین به رنگ آبی روشن تظاهر می نمودند، آنها سطح نسبتاً صافی داشته و بخشی مواج داشتند ، همچنین دارای یک ساختار خطی منحنی درونی به رنگ بنفش -صورتی بودند ، مشابه با رگبرگ منحنی مشهود درکیست کاذب تریکوموناس فتوس گاوی . علاوه بر این برخی از این عناصر قطره ای شکل نامعین در اسمیر رنگ آمیز شده با محلول لوگول یک ساختار بیضی شکل درونی را نشان می دادند(تصویر 3).
تصویر 3: ریخت شناسی نمونه از تریکوموناد های مشهود درنمونه اسمیر تهیه شده از مدفع رقیق شده با محلول نمکی گربه مبتلا به اسهال. نوک پیکان در a و b به ترتیب نشانگر تاژک قدامی و غشای مواج می باشد.
مطابق با ویژگی های ریخت شناسی عناصر انگلی یک عفونت مشکوک به تریکوموناس فتوس یا بواسطه پنتاتریکوموناس همونیس مورد فرض واقع گردید . ارزیابی و تجزیه تحلیل دومین نمونه های مدفوع رقیق شده توسط محلول نمکی مدفوع تازه اخذ شده تنها حضور تروفوزوئیت های متعلق به تریکوموناس فتوس/ پنتا تریکوموناس هومونیس را که غشایی مواج ، تاژک و حرکت سریع به جلو دارند را تایید نمود(تصویر 4).
تصویر 4: عناصر نامعین قطره ای شکل در نمونه اسمیر مدفوع رنگ آمیزی شده با محلول لوگول a و گیمسا b-c . نوک پیکان در a نشانگر ساختار بیضی درونی است. نوک پیکان در b نشانگر ساختار خطی منحنی است . نوک پیکان در c نشانگر بخش مواج سطحی است.
نمونه های مدفوع توسط روش realtime PCR با هدف ژن rRNA ریبوزومی 5.8S تریکوموناس فتوس مورد پردازش و ارزیابی ملکولی قرار گرفتند. ارزیابی ملکولی اسید نوکلوئیک استخراج شده از نمونه های مدفوع هر دو گربه حضور ریزجاندار تریکوموناس فتوس را تایید نمود. تشخیص نهایی آلودگی توماً با ترکوموناس فتوس و ژیاردیا دئودونالیس در هر دو گربه بود. متعاقب این نتایج نهایی آزمایشگاه انگل شناسی و تشخیص اولیه آلودگی با تریکوموناس فتوس هر دو حیوان تحت درمان با رونیدازول قرار گرفتند( 30میلی گرم برای هر کیلو خوراکی یک بار در روز ) برای 14 روز. پیش از تعلیق درمان ارزیابی های انگل شناسی و آزمون PCR انجام و نمونه های مدفوع منفی بودند. شش هفته پس از درمان صاحب دام گزارش نمود که گربه مدفوع عادی داشته و نتایج آزمایشگاه انگل شناسی برای مدفع گربه ها منفی است.
